A koronavírus teszt kisokos – Melyik mire és hogyan használható 2. rész

A koronavírus miatt a mindennapi beszélgetésekben is megjelent a PCR, vírusgenom, RNS, gyorsteszt, antigén, ellenanyag szó. De mit is jelentenek ezek pontosan?

A jelenleg zajló világjárvány miatt a virológiai laboratóriumi diagnosztika a figyelem középpontjába került. A hétköznapi beszéd részévé váltak a virológiai, immunológiai, diagnosztikai szakszavak: a napi sajtóanyagokban, híradásokban, de a közbeszédben is megjelent a PCR, vírusgenom, RNS, gyorsteszt, antigén, ellenanyag, átvészelt fertőzés, neutralizáló ellenanyag és még sok más, a témához kapcsolódó kifejezés.

Az tudomany.hu-nak most Csoma Eszter, a Debreceni Egyetem Orvosi Mikrobiologiai Intézetének adjunktusa írt részletes összefoglalót a vírusdiagnosztikával kapcsolatos legfontosabb tudnivalókról.

Milyen módszereket használunk a vírus direkt kimutatására?

1. A vírus örökítőanyagának, azaz RNS-ének kimutatását lehetővé tevő módszerek

Ez a bizonyos RNS teszi egyedivé ezt a vírust, így alkalmas arra, hogy általa a vírus jelenlétét bizonyítsuk. A vizsgálatot molekuláris biológiai módszerekkel végezhetjük. Ezek valójában nukleinsav-amplifikációs (felsokszorozó) módszerek, amelyek közül a PCR, azaz a polimeráz-láncreakció a legelterjedtebben használt. Valójában még a PCR is csak egy gyűjtőnév, ami sok lehetőséget foglal magába. Leginkább valós idejű, reverz transzkripciós PCR-t végzünk. A nagyobb módszertani elmélyülés egy külön cikket is megtöltene, helyette csak röviden: a vírus RNS-ének jól meghatározott, specifikus szakaszát vagy szakaszait felsokszorozzuk és kimutathatóvá tesszük. Ha a vírus több szakaszát vizsgáljuk egyszerre, növelhetjük a kimutatás specificitását és szenzitivitását is. Ráadásul a detektálást a felsokszorozással egy időben végezzük, így a kiértékelés lényegesen gyorsabbá válhat. Tulajdonképpen ez a módszer a kimutatás ún. aranystandardja, vagyis ez a legjobb és legbiztosabb módszerünk.

Mi szükséges ehhez a módszerhez?

A vírus RNS-e. Mivel a vírus RNS-ét akarjuk kimutatni, ezt a PCR reagensei számára hozzáférhetővé kell tennünk a mintából. Nagyon leegyszerűsítve: a vírus RNS-e jelen lehet nagyjából szabadon a sejteken belül, de jelen lehet a víruson belül, a vírus pedig a sejten belül. Ez a sok minden, ami körülveszi az RNS-t, gyakorlatilag akadályt képez, így a PCR nem tud végbemenni. Valahogyan ki kell szabadítani az RNS-t. Erre sokféle RNS-izolálási módszert használhatunk, ami történhet kézzel vagy gépekkel, automatizálva is. Ilyen mennyiségű gépre, reagensre, műanyag árura soha nem volt még szükség. A gyártóknak úgy kellett volna sokszorosára növelni kapacitásaikat, hogy őket is sújtotta a járvány hatása. A reagensek, műanyagok, automaták elérhetősége korlátozott és akadozó volt, és jelenleg is problémát okoz. Így olyan PCR-tesztek fejlesztése is megindult, amelyek nem igénylik az előzetes RNS-izolálást, hanem a mintából közvetlenül végezhetők. Sőt, nem PCR-alapú vizsgálatok (lásd később) is előtérbe kerültek.

A PCR-hez szükséges reagensek. A diagnosztikai PCR-eket kereskedelmi forgalomban kapható kitekkel végezzük. Ezek megfelelő tesztelésen estek át, és egy erre kijelölt szakmai szervezet engedélyezte a használatukat.

Maga a PCR egy gépben zajlik. Egy bizonyos teszt adott gépeken futtatható, azzal kompatibilis, illetve arra vizsgálták. Ebben a gépben meghatározott számú mintát (96, de akár 384) lehet egyszerre vizsgálni, ami adott ideig tart. Így minél több mintát akarunk egy időegység (például 1 nap) alatt vizsgálni, annál több gépre lehet szükségünk.

Mennyire jók a PCR-tesztek?

Általánosságban elmondható, hogy specificitásuk nagyon magas (akár 100%), és szenzitivitásuk is kiváló. Ez azt jelenti, hogy alkalmasak arra, hogy nagyon kis mennyiségű vírust is képesek legyenek kimutatni (hogy pontosan mennyit, az tesztenként változó). Illetve egyértelműen azonosíthatjuk a SARS-CoV-2 RNS-ét.

Mennyire megbízhatóak az eredmények?

A laboratóriumban jól képzett kollégák, esetleg automaták végzik a vizsgálatokat. Ember és gép által végzett vizsgálatnál is lehetséges azonban hiba. Éppen ezért minden vizsgálat megfelelően kontrollált. Kontrolláljuk az RNS-izolálás sikerességét, a PCR sikerességét, a szennyeződés lehetőségét. A minták értékelése csak akkor történhet meg, ha a kontrollok az előírásoknak megfelelnek.

Ki adhat eredményt?

Az eredmények értékelését, a leletezést kizárólag magasan képzett, az orvosi mikrobiológia területén szakképesítéssel és nagy tapasztalattal rendelkező szakemberek végzik. Magyarországon az Emberi Erőforrások Minisztériumának minisztere jelölte ki azokat a laboratóriumokat, ahol a SARS-CoV-2 PCR-vizsgálatok végezhetők és kötelezően végzendők. Ezek közt a laboratóriumok közt számos olyan egyetemi laboratórium is van, ahol az orvosi, klinikai mikrobiológiában szakképzettek egyben kutatók és egyetemi oktatók is.

Milyen eredményt közöl a laboratórium, és mit jelentenek ezek?

A PCR eredménye: NEM ÉRTÉKELHETŐ

Ha a mintából az RNS-izolálás vagy a PCR sikerességét jelző kontroll nem megfelelő, akkor a vírus RNS kimutatását célzó PCR negatív eredménye nem fogadható el. Vagy az RNS-izolálás volt sikertelen, vagy a PCR. Ennek lehet az az oka, hogy a minta olyan gátlóanyagokat tartalmaz, amelyek megakadályozzák a reakció sikerességét. Lehet, hogy ott volt a mintában a vírus, de nem tudtuk az RNS-ét hozzáférhetővé tenni, de akár helytelen mintavétel vagy a mintatárolás is állhat a háttérben. Ha a vizsgálati eredményre szükség van, a mintavételt meg kell ismételni.